全自動(dòng)生化分析儀由于其清洗系統(tǒng)的工作模式所致,常出現(xiàn)一個(gè)項(xiàng)目對(duì)緊隨其后的一個(gè)甚至幾個(gè)項(xiàng)目的測(cè)定帶來一定程度的試劑污染,并隨著儀器使用時(shí)間的累加,儀器狀況的下降,試劑交叉污染的程度會(huì)有所增加。在實(shí)際工作中主要表現(xiàn)為某一項(xiàng)目的測(cè)定結(jié)果一直符合臨床要求,可是一段時(shí)間以后測(cè)定結(jié)果趨高,并且日益明顯;而單獨(dú)測(cè)定該項(xiàng)目時(shí)測(cè)值又合理起來,給日常工作帶來極大的不便。因此避免試劑間的干擾非常重要。
試劑間的干擾原因
1、試劑中含有下一測(cè)試所要測(cè)定的底物,或是含有的某種試劑成分與下一反應(yīng)所要測(cè)定的底物有作用,因而直接干擾下一反應(yīng)的測(cè)定結(jié)果;
2、該試劑所引導(dǎo)的反應(yīng)對(duì)下一項(xiàng)目的反應(yīng)進(jìn)程帶來了間接的干擾,因?yàn)樵谟性噭┪廴镜那闆r下,下一項(xiàng)目所測(cè)定的是前后兩個(gè)項(xiàng)目反應(yīng)的綜合作用結(jié)果。下面通過對(duì)試劑成分的分析和相應(yīng)試驗(yàn)來找出試劑交叉污染可能帶來的情況,進(jìn)而指導(dǎo)相應(yīng)的項(xiàng)目調(diào)整和結(jié)果分析。
試劑間可能發(fā)生的干擾情況
1、ALT(IFCC)、AST(IFCC)試劑中含有高活力LD成分,有可能會(huì)對(duì)LD的測(cè)定帶來干擾;
2、ALP(IFCC)、CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)、CO2(PEPC)、α-Amy(EPS)等試劑中使用磷酸緩沖液,可能會(huì)對(duì)其后的Mg2+ 測(cè)定帶來干擾;
3、ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、 UA(Uricase)、 α-HBDH(DGKC)等試劑使用磷酸緩沖液,可能會(huì)對(duì)無機(jī)磷的測(cè)定帶來干擾;
4、CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)試劑中含有Glu成分,其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反應(yīng)過程,因此可能對(duì)Glu測(cè)定帶來干擾,尤其對(duì)Glu的HK法測(cè)定可能帶來嚴(yán)重干擾;
5、Mg2+試劑 (Calmagite)中含有EGTA成分,為Ca2+絡(luò)合劑,可能對(duì)Ca2+的測(cè)定帶來干擾;
6、個(gè)別試劑以甘油做酶的保護(hù)劑,因此可能對(duì)TG的測(cè)定帶來干擾,等等;
7、低密度脂蛋白、甘油三酯、膽固醇的試劑成分中都含有CE、CHOD、POD酶,都會(huì)與血清成分反應(yīng),生成的中間反應(yīng)產(chǎn)物是H2O2濃度,因?yàn)榈兔芏戎鞍缀透视腿z測(cè)單位都是mmol/L級(jí),而尿酸檢測(cè)單位是μmol/L級(jí),二者之間相差1 000倍,故檢測(cè)尿酸的反應(yīng)杯中只要?dú)埩魳O少量的低密度脂蛋白和膽固醇試劑就可產(chǎn)生大量的H2O2,直接導(dǎo)致尿酸的檢測(cè)結(jié)果的升高;
8、葡萄糖對(duì)尿酸試劑的干擾GLU(OX)與UA測(cè)定原理均采用Trider's反應(yīng)方法,試劑探針殘留攜帶的GLU帶入到UA反應(yīng)體系,發(fā)生血糖反應(yīng)其產(chǎn)物紅色醌亞胺與UA產(chǎn)物紅色醌亞胺顏色疊加,而血清中正常血糖含量遠(yuǎn)高于尿酸水平,從而導(dǎo)致UA結(jié)果嚴(yán)重偏高;
9、膽固醇(TC)、甘油三醋(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL) 會(huì)對(duì)總膽汁酸檢測(cè)的影響,導(dǎo)致膽汁酸測(cè)定值增加。這些試劑中為了保證反應(yīng)充分,往往含有膽酸鈉成分或是一些脂類水解促進(jìn)劑等,這些物質(zhì)導(dǎo)致了樣本膽汁酸測(cè)定的攜帶性增高及內(nèi)源產(chǎn)物等副反應(yīng)性增高;
10、谷丙中的含有的酮戊二酸NADH反應(yīng)體系會(huì)干擾總膽汁酸檢測(cè)中的Thio-NAD-Thio-NADH循環(huán)指示體系,導(dǎo)致測(cè)定值偏低;
由于各個(gè)試劑公司所提供的產(chǎn)品說明書常不能全面反映試劑的組成情況,所以通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)試劑交叉污染可能帶來的干擾變得很重要。下面以兩個(gè)試驗(yàn)來加以說明:
A、將試劑作為樣本進(jìn)行全套項(xiàng)目測(cè)定,根據(jù)結(jié)果確定發(fā)生試劑交叉污染時(shí)造成直接干擾的項(xiàng)目。
B、將一份樣本分為兩份,一份加生理鹽水或其他適當(dāng)?shù)南♂屢海硪环菁拥攘康脑噭?,同時(shí)測(cè)定、考察結(jié)果的變化,進(jìn)而確定可能發(fā)生試劑交叉污染時(shí)造成干擾的項(xiàng)目。進(jìn)行這一實(shí)驗(yàn)時(shí),使用半自動(dòng)生化分析儀可能會(huì)得到更為理想的結(jié)果,尤其是針對(duì)雙試劑反應(yīng)時(shí), R1、R2加入時(shí)機(jī)可以得到更為精確的控制。
此外,由于試劑成分的復(fù)雜多樣性,實(shí)時(shí)儀器狀況的獨(dú)特性,可能發(fā)生的試劑間的交叉污染的情況不盡相同。
試劑間的交叉污染會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性,因此隔絕二者間的聯(lián)系非常重要。一般在安排項(xiàng)目順序時(shí)要求兩個(gè)項(xiàng)目間至少要有一個(gè)非干擾項(xiàng)目,而最徹底的做法則是將被干擾項(xiàng)目置于干擾項(xiàng)目之前以消除干擾。同時(shí)要求檢驗(yàn)人員對(duì)儀器的工作狀態(tài)要了如指掌,并在一個(gè)樣本的項(xiàng)目選擇或一個(gè)樣本的最后一項(xiàng)與下一樣本的第一個(gè)項(xiàng)目選擇時(shí)對(duì)于試劑交叉污染的可能性加以考慮,合理安排項(xiàng)目順序,以便得到更為合理的結(jié)果。
實(shí)際工作中,用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行連續(xù)的多個(gè)項(xiàng)目的測(cè)定,每個(gè)反應(yīng)的詳細(xì)過程難以探知,因此理論分析結(jié)合實(shí)際應(yīng)用方可摸索出符合本單位工作的方法。